基因型

F– ara Δ(lac-proAB) rpsL (StrR)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15]thi hsdR

簡(jiǎn)要說(shuō)明

TB1感受態(tài)細(xì)胞來(lái)源于JM83，是JM83hsdR型，只含有大腸桿菌RNA polymerase，缺少BL21(DE3)菌株的 T7 RNA polymerase，適合NEB公司的pMAL系列質(zhì)粒原核蛋白表達(dá)(The pMAL vectors use the E. coliRNApolymerase)，不能用于pET系列質(zhì)粒的表達(dá)，具有l(wèi)ian霉素抗性。TB1感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。

操作說(shuō)明

1、取100μl冰上融化的TB1感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。